不同發(fā)酵時間對益生菌發(fā)酵飼料營養(yǎng)成分和品質(zhì)的影響
摘要:為了研究不同發(fā)酵時間對益生菌發(fā)酵飼料營養(yǎng)成分、體外消化率及飼料品質(zhì)的影響,試驗按照27.5%豆粕、50%酒糟粉、15%菜籽粕和7.5%血粉將飼料原料混合均勻,接種5%益生菌發(fā)酵液和35%水分,30℃密封發(fā)酵,測定在不同發(fā)酵時間時發(fā)酵飼料的營養(yǎng)成分、體外消化率、干物質(zhì)回收率、乳酸菌數(shù)量、乳酸含量和pH值。結果表明:隨著發(fā)酵時間的延長,飼料中粗蛋白(CP)含量持續(xù)顯著升高(P<0.05),發(fā)酵第10天與發(fā)酵第15天比較差異不顯著(P>0.05);發(fā)酵第15天真蛋白率顯著低于發(fā)酵第30分鐘(P<0.05);銨態(tài)氮(NH3-N)含量和CP體外消化率均隨著發(fā)酵時間延長極顯著增加(P<0.01);與發(fā)酵第30分鐘相比,各時間點干物質(zhì)回收率均顯著降低(P<0.05);飼料中乳酸菌數(shù)量隨著發(fā)酵時間的延長先上升后下降,發(fā)酵第10天乳酸菌數(shù)量最高;乳酸含量隨著發(fā)酵時間延長持續(xù)極顯著升高(P<0.01);pH值隨著發(fā)酵時間延長持續(xù)極顯著降低(P<0.01)。說明在此次發(fā)酵條件下,最佳發(fā)酵時間為6d,飼料營養(yǎng)成分含量、體外消化率、乳酸含量和乳酸菌數(shù)量均處于較好水平,干物質(zhì)回收率較高。
益生菌發(fā)酵飼料是一種利用有益微生物對飼料原料進行固態(tài)發(fā)酵處理,獲得含活性益生菌、酶、礦物質(zhì)和多種未知促生長因子等活性組分的高品質(zhì)生物飼料,并且發(fā)酵飼料中含有低分子質(zhì)量多肽、寡糖、有機酸(丁酸)等活性物質(zhì),發(fā)酵處理可降解飼料原料中的抗營養(yǎng)成分,提高其消化率,從而顯著提高其營養(yǎng)品質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn),發(fā)酵可提高飼料粗蛋白(CP)含量,如徐文俊等以稻草、玉米芯、麥稈為主料,經(jīng)金鳳菇菌種發(fā)酵后其CP含量分別由4.1%提高到10.7%、1.1%提高到21.1%、2.7%提高到10.3%;同樣以稻草、玉米芯、麥稈為主料,經(jīng)鳳尾菇菌種發(fā)酵后其CP含量分別由4.10%提高到6.74%、1.10%提高到5.52%、2.70%提高到5.67%。蔡興旺等研究發(fā)現(xiàn),用秸稈發(fā)酵處理玉米秸,發(fā)酵后玉米秸中CP含量由4.91%提高到6.09%。肖連冬等用日本酵素菌發(fā)酵飼料,結果其CP含量由20.01%提高到28.29%。動物試驗也證實,飼喂益生菌發(fā)酵飼料可顯著提高動物的生長性能,改善動物腸道消化功能和健康水平。陳鑫珠等研究發(fā)現(xiàn),菌糠青貯發(fā)酵飼料的發(fā)酵時間不宜過長,發(fā)酵時間過長,青貯飼料中的不良產(chǎn)物銨態(tài)氮(NH3-N)、乙酸丁酸等的含量會顯著升高。
乳酸菌是畜禽腸道內(nèi)的正常菌群。近年來,它作為一種益生菌被廣泛應用在發(fā)酵飼料中。乳酸菌發(fā)酵可產(chǎn)生大量乳酸,使pH值降低,從而改變有害菌嗜中性的生長環(huán)境,抑制或殺死有害菌,此外大量益生菌形成優(yōu)勢菌群與有害菌爭奪空間和養(yǎng)料,對其產(chǎn)生競爭性抑制。J.A.Missotten等研究發(fā)現(xiàn),從豬回腸和盲腸食糜中分離出的10種乳酸菌對沙門氏桿菌都表現(xiàn)出高度的頡頏性,用這些乳酸菌發(fā)酵飼料48h后乳酸產(chǎn)量在100mmol/L以上,飼料pH值降到4.50以下。孫合美等研究發(fā)現(xiàn),用植物乳桿菌和戊糖片球菌的混合菌種發(fā)酵配合飼料,48h內(nèi)乳酸菌含量呈迅速上升趨勢,pH值呈迅速下降趨勢,進一步延長發(fā)酵時間,發(fā)酵飼料中乳酸菌含量的變化趨勢尚未報道。因此,探明發(fā)酵時間對益生菌發(fā)酵飼料中營養(yǎng)成分含量和品質(zhì)的影響對于科學使用益生菌發(fā)酵飼料具有重要意義。
1材料與方法
1.1 材料
發(fā)酵用飼料豆粕、酒糟粉、菜籽粕和血粉均從市場采購;益生菌發(fā)酵液由上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司提供,其主要成分為芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌等,活菌數(shù)≥5.0×109cfu/mL,其中乳酸菌數(shù)=1.2×109cfu/mL。
1.2 方法
1.2.1 發(fā)酵工藝
將各原料組分豆粕、酒糟粉、菜籽粉和血粉粉碎后按照27.59%、50%、15%和7.5%比例混合均勻,接種5%益生菌發(fā)酵液和35%水分,用錫箔袋裝好15袋并密封,每袋裝飼料約500g,分為5組,每組3袋,分別置30℃恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵培養(yǎng)30min和3、6、10、15d。
1.2.2 營養(yǎng)成分、體外消化率、干物質(zhì)回收率、乳酸含量、乳酸菌數(shù)量以及pH值的測定
當發(fā)酵至第30分鐘和第3、6、10、15天時,從培養(yǎng)箱中取出錫箔袋,采用烘干法測定水分含量,凱氏定氮法測定CP和真蛋白含量,苯酚次氯酸鈉比色法測定NH3-N含量、南京建成生物工程研究所試劑盒測定乳酸含量、pH計測定pH值,平板計數(shù)法計數(shù)乳酸菌數(shù)量,胃蛋白酶-胰蛋白酶兩步法測定CP體外消化率,并按照飼料發(fā)酵前后重量和干物質(zhì)含量計算干物質(zhì)回收率。
1.2.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析
采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標準差”表示,采用單因素方差分析和鄧肯氏多重比較法進行顯著性分析,P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。
2結果與分析
2.1發(fā)酵時間對飼料營養(yǎng)成分、體外消化率和干物質(zhì)回收率的影響
結果見表1。

由表1可知:CP含量隨著發(fā)酵時間的延長而顯著增加,第15天時比第30分鐘時增加了2.43%,差異顯著(P<0.05);真蛋白率隨著發(fā)酵時間的延長降低,第3,6,10天與第30分鐘相比差異不顯著(P>0.05),第15天與第30分鐘相比真蛋白率顯著降低(P<0.05);NH3-N含量隨著發(fā)酵時間延長而極顯著增加(P<0.01);CP體外消化率隨著發(fā)酵時間的延長而極顯著提高,且第15天比第30分鐘提高了13.02%(P<0.01);與發(fā)酵第30分鐘時相比,飼料干物質(zhì)回收率隨著發(fā)酵時間的延長而逐漸減低,到第15天時回收率為97.46%(P<0.05)。
2.2發(fā)酵時間對飼料中乳酸菌數(shù)量、乳酸含量及pH值的影響
結果見表2
3討 論
3.1發(fā)酵提高飼料CP含量和體外消化率
發(fā)酵可提高飼料CP含量,本試驗使用復合益生菌發(fā)酵液發(fā)酵飼料至第15天時,CP含量增加了2.43%,差異顯著(P<0.05),這與多數(shù)研究報道結果相符。對于發(fā)酵是如何提高飼料CP含量的,張紅等提出微生物在呼吸時要消耗一部分原料,使產(chǎn)物總量減少,導致產(chǎn)物中蛋白質(zhì)含量的表觀值增加,這一現(xiàn)象被稱之為“濃縮效應”。王旭明等研究發(fā)現(xiàn),微生物發(fā)酵提高飼料CP含量是由于發(fā)酵過程中物料損失,增加的蛋白質(zhì)絕大部分是菌體利用外加氮源合成自身蛋白質(zhì)的絕對增長。本試驗中,飼料CP含量增加了2.43%,真蛋白率下降2.59%,NH3-N含量在發(fā)酵初期迅速增加,說明微生物在早期劇烈生命活動中消耗掉了部分原料,因此隨著發(fā)酵時間的延長,飼料被消耗得越多,飼料干物質(zhì)的回收率降低得越明顯,至發(fā)酵第15天時,干物質(zhì)回收率只有97.46%。由此可見,采用該復合益生菌發(fā)酵液及本發(fā)酵工藝進行發(fā)酵,并不能使飼料的CP含量提高,其表面數(shù)字的增加只是“濃縮效應”造成的。
研究發(fā)現(xiàn),發(fā)酵可提高飼料蛋白質(zhì)的消化率,如豆粕經(jīng)少孢根霉RT-3發(fā)酵后,蛋白質(zhì)消化率顯著提高,用復合益生菌發(fā)酵液飼料喂豬,飼料CP體外消化率提高了1.8%。在本試驗中,CP體外消化率隨著發(fā)酵時間的延長而提高,發(fā)酵第15天時CP體外消化率比發(fā)酵30分鐘時提高了13.02%且差異極顯著(P<0.01),其原因可能是益生菌利用飼料中的植物蛋白進行生長繁殖,使大分子蛋白質(zhì)降解成小分子肽,蛋白質(zhì)的品質(zhì)得到改善,易于消化,但還有待進一步研究證明。
3.2發(fā)酵提高飼料乳酸菌數(shù)量、增加乳酸含量同時降低pH值
曹冬梅等對乳酸菌HB02與黃曲霉進行共同培養(yǎng),結果發(fā)現(xiàn)黃曲霉菌絲產(chǎn)量和黃曲霉毒素B1產(chǎn)量均比單獨培養(yǎng)黃曲霉時低。王小紅等對保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和金黃色葡萄球菌進行混合培養(yǎng),結果發(fā)現(xiàn)隨著培養(yǎng)時間的延長,pH值降低,而較強的酸性環(huán)境可增強乳酸菌發(fā)酵液對金黃色葡萄球菌的抑制作用。在本試驗中,隨著發(fā)酵時間的延長,發(fā)酵至第6天時,飼料中乳酸含量基本穩(wěn)定,達到了71.88mmol/g,pH值變化也較小,在4.50以下;發(fā)酵至第10天,乳酸菌數(shù)量達到最大值,為28.91×108cfu/g??梢?,發(fā)酵6~10d可以有效抑制有害菌的生長繁殖,有助于養(yǎng)殖動物的健康生長。
4結 論
發(fā)酵可使飼料的蛋白質(zhì)體外消化率得到提高,也就是說飼料蛋白質(zhì)的利用率得到提高,節(jié)約成本。在發(fā)酵過程中益生菌快速生長繁殖,產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物,如乳酸和其他有機酸等,使飼料pH值降低,有助于抑制有害菌的生長及相關毒素的分泌。
在本試驗發(fā)酵條件下,發(fā)酵至第6天與以后時間相比較,飼料CP體外消化率、乳酸含量及pH值變化較小??紤]到發(fā)酵時間越長飼料的回收率越低、所需的成本相應增加等因素,而且周期長不利于生產(chǎn)的快速運轉,因此選擇的最佳發(fā)酵時間是。
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